ALSTEM M050說明書

ALSTEM是一家位于灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產品和服務組合，為生物制藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專業知識的科學家創立。

EZStem™ Stem Cell Freezing Medium: #M050

EZStem™干細胞冷凍培養基：＃M050

產品描述

開發EZStem™干細胞冷凍培養基，在培養人胚胎干（ES）和誘導多能干細胞（iPS）時，在冷凍保存期間保持無異源和無飼養細胞條件。它是一種用于人ES / iPS細胞冷凍保存的即用型解決方案。用EZStem TM干細胞冷凍培養基保存的人多能干細胞導致高細胞活力和恢復，并且在解凍后表達典型的多能標記物。EZStem™干細胞冷凍培養基已經在人ES和iPS細胞上進行了測試。與含有血清的冷凍培養基和競爭無血清產品相比，獲得了更好的結果，使其成為用于冷凍保存有價值的人多能干細胞的理想產品。

• 概觀

該方案可用于冷凍保存用飼養細胞培養的人胚胎干（hES）細胞或無飼養細胞條件。該方法描述了在6孔板的一個孔中培養的細胞的冷凍保存。如果冷凍多個孔，可以按比例放大量，但是，每個低溫小瓶中只應將1ml細胞懸浮液等分。始終將EZStem Freezing Medium放在冰上。

• 程序

1.在冰上準備EZStem冷凍培養基。

2.在6孔板中培養細胞直至60％至80％匯合。

3.從hES / hiPS細胞培養物中吸出培養基并用DPBS（2mL /孔）沖洗。

4.每孔加入0.5mL EZStem無酶干細胞解離溶液（目錄號M100，ALSTEM）。將其在室溫下靜置1-2分鐘。

5.吸出解離溶液，每孔用2 mL DMEM / F-12輕輕沖洗2 - 3次。

6.加入2mL /孔新鮮培養基，用細胞刮刀刮去菌落。

7.將分離的細胞懸浮液轉移至15mL錐形管中。

8.在室溫下以200×g離心5分鐘。

9.輕輕吸出上清液，輕敲管底，松開細胞沉淀。

10.輕輕地將顆粒重新懸浮在冷的EZStem冷凍培養基中，注意使團塊留下比通常用于傳代的團塊更大的團塊。

11.將1mL細胞懸浮液轉移到每個標記的低溫小瓶中。

12.將小瓶放入異丙醇冷凍容器中，將容器置于-80℃過夜。

13.第二天轉移到液氮罐。

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