線性聚乙烯亞胺PEI MW40000說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品描述

BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品，因其較高的轉(zhuǎn)染效果，已廣泛應(yīng)用于AAV，LV和重組蛋白等工業(yè)化生產(chǎn)。

聚乙烯亞胺是一種具有較高陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔兩個(gè)碳原子，即每第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿"體(proton sponge)，因此，非常容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復(fù)合物顆粒，該顆粒與細(xì)胞表面陰離子結(jié)合，很容易通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞；并且可抵御溶酶體的降解作用，從而提高核酸分子的表達(dá)水平。

相關(guān)貨號(hào)：

基本信息

CAS 49553-93-7

分子式 (C2H5N)n . xHCl

分子量 40,000 (~22,000 free base)

熔點(diǎn) 73-75℃

溶解性 溶于冷水

不溶于 常用有機(jī)溶劑（乙醇、丙酮、*）

形式 白色固體粉末

生物毒性 未知

安全防護(hù) 手套，護(hù)目鏡，口罩

存儲(chǔ) 粉末至少可以保存一年， PEI內(nèi)含自由氨基，建議開(kāi)封后4℃干燥保存，減緩氧化過(guò)程。

運(yùn)輸 常溫運(yùn)輸

特點(diǎn) 大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)反饋，細(xì)胞通用性好，有非常好的轉(zhuǎn)染效果，尤其對(duì)293，CHO細(xì)胞系有特別顯著的轉(zhuǎn)染效果。

配置方法

轉(zhuǎn)染操作流程：(貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)

1. 接種細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔加入的細(xì)胞量參考下圖表1，一般18-24小時(shí)（sf9細(xì)胞為3-4小時(shí)）后轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度應(yīng)至少達(dá)到 70~80%以上。轉(zhuǎn)染前更換為含5%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。 （稀釋PEI和DNA的體積為培養(yǎng)體積的1/10-1/20, DNA濃度為1ug/ml）

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞： 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。轉(zhuǎn)染4-6小時(shí)（sf9細(xì)胞為2小時(shí) )后，更換為生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后最快 7 h 即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合的檢測(cè)時(shí)間。

5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過(guò)夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

轉(zhuǎn)染操作流程：(懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法)

1. 轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備：懸浮細(xì)胞傳代接種于適量含懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細(xì)胞密度（例100mL培養(yǎng)瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng)，2~4小時(shí)后可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞：將PEI-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，搖勻后旋緊瓶口放回?fù)u床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測(cè)。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合的檢測(cè)時(shí)間。

5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量，有文獻(xiàn)表明轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，可以適當(dāng)稀釋細(xì)胞，稀釋比例參考范圍（1:2—1:5）之間，可以增加蛋白產(chǎn)量，稀釋效應(yīng)與最佳稀釋比率應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

產(chǎn)品背景

        BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉(zhuǎn)染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達(dá)系統(tǒng)中，相比于市面上的脂質(zhì)體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達(dá)量（無(wú) 論是 96 孔板還是 100L 的細(xì)胞反應(yīng)器），以及更小的細(xì)胞毒性、更高的轉(zhuǎn)染效和更高的可 重復(fù)性，并且十分經(jīng)濟(jì)的高性價(jià)比轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品具有以下特點(diǎn)：

1.轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低；  蛋白表達(dá)量高；

2.節(jié)約成本：BIOHUB 78 PEI轉(zhuǎn)染試劑 ，進(jìn)口品質(zhì)，親民價(jià)格，至少能夠降 40% 的轉(zhuǎn)染試劑總成本；

3.適用于 HEK293 等真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

4.適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染；

5.適用于有血清和無(wú)血清的轉(zhuǎn)染條件；

6. 無(wú)機(jī)試劑，無(wú)動(dòng)物源成分；

7. 產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴(yán)格；

8. 工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。

產(chǎn)品反饋

注意事項(xiàng)

  1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

  2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

  3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn) ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。 

  4.一定要溶解充分，溶解不充分會(huì)影響后續(xù)的轉(zhuǎn)染效率.

  5.冷凍后可能會(huì)影響其后續(xù)轉(zhuǎn)染效果。

  特別提醒：初次使用 78PEI 進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)先做預(yù)試，優(yōu)化出適合自己實(shí)驗(yàn)的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常篩選范圍在 1:1 到 5:1 之間，如果之前用過(guò)Polysciences品牌的 PEI，用 78BioPEI 時(shí)應(yīng)適當(dāng)降低使用濃度。