cosmobiousa GFK-PF201-0.25-EX說(shuō)明書(shū)

PUREfrex 2.0

貨號(hào)：

GFK-PF201-0.25-EX

$ 166.00

PUREfrex®  （由Gene Frontier Corporation制造）是一種大腸桿菌 重構(gòu)的偶聯(lián)轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)，基于初由Ueda小組開(kāi)發(fā)的PURE系統(tǒng)（Shimizu等，2001），后來(lái)商業(yè)化為PURESYSTEM®（Shimizu和Ueda， 2010年），由BioComber（日本東京）提供。PUREfrex®包含高度純化的 大腸桿菌蛋白質(zhì)，包括用于氨酰化，能量再生，轉(zhuǎn)錄和翻譯的模塊。與競(jìng)爭(zhēng)的耦合轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)相比，PUREfrex®的許多優(yōu)點(diǎn)中包括降低的污染性蛋白酶，核酸酶和磷酸酶，β-半乳糖苷酶和LPS的水平。與基于細(xì)胞裂解物的系統(tǒng)相比，PUREfrex®的化學(xué)定義更加明確和模塊化，可帶來(lái)更高的產(chǎn)量，可重復(fù)性和靈活性。在未標(biāo)記 PUREfrex®的蛋白質(zhì)成分（與BioComber的PURESYSTEM®和New England Biolab的PURExpress®系統(tǒng)的六組氨酸標(biāo)記成分相反）允許在目標(biāo)蛋白質(zhì)中添加任何所需的標(biāo)簽（包括His-tags），并隨后通過(guò)快速簡(jiǎn)單地純化一個(gè)固定的金屬親和色譜步驟。蛋白質(zhì)產(chǎn)量可以達(dá)到600ng / ul。

PUREfrex®有兩種形式：PUREfrex®2.0和PUREfrex®2.1。PUREfrex®2.1與PUREfrex®2.0相同，其附加功能使用戶(hù)可以控制氧化還原條件。這對(duì)于需要特殊氧化還原條件以實(shí)現(xiàn)適當(dāng)折疊，活性和溶解度的蛋白質(zhì)很有用。此外，還提供補(bǔ)充產(chǎn)品來(lái)進(jìn)一步增強(qiáng)適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)折疊和二硫鍵形成（GroE Mix，DnaK Mix和DS Supplement  （將逐步淘汰并由Dsbc Set代替））。

通過(guò)利用Protein Express的 tRNA試劑的CloverDirect™系列進(jìn)行定點(diǎn)蛋白質(zhì)功能化，可以將PUREfrex®用于表達(dá)包含非天然氨基酸的  蛋白質(zhì)。可用CloverDirect™UAG或CGGG氨酰基tRNA填充不同的非天然氨基酸，這些氨基酸賦予一系列功能，包括熒光標(biāo)記，生物素標(biāo)記，聚乙二醇化，化學(xué)交聯(lián)和光調(diào)節(jié)。通過(guò)設(shè)計(jì)在用戶(hù)定義位置具有UAG和/或CGGG密碼子的蛋白質(zhì)表達(dá)模板，可以實(shí)現(xiàn)特定非天然氨基酸的靶向摻入。

對(duì)于模板構(gòu)建，我們建議使用Protein Express線性模板PCR試劑盒（有兩種形式：僅His-tag或ProX-tag + His-tag）或Protein Express的表達(dá)質(zhì)粒（pROX-FL92.1：ProX-tag + His-標(biāo)簽）或BioComber（pURE1-4：無(wú)標(biāo)簽）。ProX標(biāo)簽是特殊的N末端肽，設(shè)計(jì)用于摻入某些需要N末端定位（密碼子9）和特定密碼子背景（由AAC和TCT修飾）的大型非天然氨基酸。ProX標(biāo)簽的密碼子9可以在UAG，CGGG或TTT（作為對(duì)照）之間變化。