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biochain Z5030012說明書

更新時間：2020-07-21 點擊次數：2503

biochain Z5030012說明書

Malachite Green Phosphate Assay Kit

孔雀石綠磷酸鹽檢測試劑盒

總覽

BioChain的孔雀石綠磷酸鹽檢測試劑盒基于對孔雀石綠，鉬酸鹽和游離正磷酸鹽之間形成的綠色絡合物的定量分析。通過分光光度計（600 – 660 nm）或酶標儀可以方便地測量反應迅速形成的顏色。非放射性比色測定試劑盒已經過優化，可提供出色的靈敏度和更長的保存期限。該測定方法簡單，快速，只需一個添加步驟即可測定磷酸鹽。可以在試管，比色皿或多孔板中進行測定。可以在96和384孔板中方便地進行測定，以高通量篩選酶抑制劑。

描述

BioChain的基于細胞的測定試劑盒可滿足制藥和生物技術客戶不斷增長的需求，這些需求源于從基因組學和蛋白質組學衍生出來的大量藥物靶標。我們的客戶正在尋求在基于細胞的系統中進行大規模篩選，因為準確而完整的細胞數據很有希望并可以代表生物的生理狀況。該試劑盒配有用于該測定的所有試劑的完整系統和易于遵循的方案

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒 (Z5030012)

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒是基于對孔雀綠、鉬酸鹽和游離正磷酸鹽之間形成的綠色復合物進行定量。可在分光光度計 (600-660 nm) 或酶標儀上方便地測定反應快速顯色。對非放射性比色測定試劑盒進行了優化，以提供*的靈敏度和延長的有效期。該測定法簡單、快速，涉及磷酸鹽測定的單個加入步驟。可在試管、比色皿或多孔板中執行測定。該試驗可方便地在 96 孔和 384 孔板中進行，用于高通量篩選酶抑制劑。

關鍵特征

試劑非常穩定。由于我們的創新配方，不會發生試劑沉淀。因此，測定前無需過濾試劑，這是其他市售試劑盒的常見要求。

高靈敏度和寬檢測范圍：檢測低至 1.6 pmole 的磷酸鹽，有效范圍為 0.02 M 至 40 M 磷酸鹽。

快速方便：均勻的“混合和測量”測定法可在 20 min 內定量測定游離磷酸鹽。

與常規實驗室和 HTS 格式兼容：可在試管、比色皿或微孔板、分光光度計和酶標儀上進行測定。

在 96 孔和 384 孔板中觀察到穩健且適用于 HTS：Z' 因子為 0.7-0.9。可在 HTS 液體處理系統上輕松實現自動化。

應用

磷酸酶測定：從肽、蛋白質或小分子底物中釋放磷酸鹽。

脂肪酶測定：從磷脂中釋放磷酸鹽

核苷三磷酸酶測定：從核苷三磷酸鹽（ATP、GTP、TTP、CTP 等）中釋放磷酸鹽。

磷脂、蛋白質和 DNA 等中磷酸鹽的定量

藥物發現：高通量篩選磷酸酶抑制劑。

試劑盒內容物：在 96 孔板中進行 2,500 次測定

試劑 A：50 mL 試劑 B：1 mL 標準品：1 mL 1 mM 磷酸鹽

儲存條件。試劑和標準品在 4 ℃ 下可穩定儲存 1 年。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時，應采取實驗室試劑的常規預防措施。詳細信息請參見材料安全數據表。

使用 96 孔板的程序

試劑制備。每次測定需要 20 L 工作試劑。通過混合 100 vol 試劑 A 和 1 vol 試劑 B（例如 5 mL 試劑 A 和 50 μL 試劑 B）制備足量的工作試劑。工作試劑在室溫下可穩定儲存至少 1 天。

重要提示：使用前必須將試劑恢復至室溫。每次測定前，重要的是檢查所有酶制劑和測定緩沖液中均不含游離磷酸鹽。向 80µL 樣品溶液中加入 20µL 工作試劑可方便地完成該操作。在 620 nm 處的空白 OD 值應低于 0.2，如果 OD 讀數高于 0.2，檢查磷酸水水平。雙蒸水的 OD 讀數通常低于 0.1。實驗室清潔劑可能含有高水平的磷酸鹽。*清洗后，確保實驗室器具不污染磷酸鹽。

磷酸鹽標準品的制備。通過移取 40 L 1 mM 磷酸鹽標準品，置于 960 L 蒸餾水或酶反應緩沖液中，制備含 40 M 磷酸鹽的預混溶液。試管編號。

按下表所示稀釋標準品。移取 80 L 標準品，一式兩份，置于透明底 96 孔板的孔中。加入僅含水或反應緩沖液的空白對照。

No	預混劑 + H2O	終體積 (mL)	磷酸鹽濃度 (M)	pmoles 磷酸鹽 in 50 mL
1	200mL + 0mL	200	40	2,000
2	160mL + 40mL	200	32	1,600
3	120mL + 80mL	200	24	1,200
4	80mL + 120mL	200	16	800
5	60mL + 140mL	200	12	600
6	40mL + 160mL	200	8	400
7	20mL + 180mL	200	4	200
8	0mL + 200mL	200	0	0

2. 將 80µL 供試品轉移至平板的不同孔中。

注：在酶反應的情況下，可通過加入特定抑制劑終止反應，或通過加入工作試劑直接終止反應。試驗前可能需要稀釋反應混合物（見一般注意事項）。對于 ATP 酶或 GTP 酶測定，ATP 或 GTP 濃度應低于 0.25 mM，如果反應混合物含有 > 0.25 mM 的 ATP 或 GTP，則用蒸餾水稀釋樣品。例如，如果 ATP 酶反應含有 1 mM ATP，則在反應結束時，在測定前用水將反應混合物稀釋 4 倍。

向各孔中加入 20µL 工作試劑。輕敲微孔板輕輕混勻。

4. 室溫下孵育 30 min，顯色。

5. 在酶標儀上測定 600 nm-660 nm (620 nm) 處的吸光度。

對于 384 孔板中的測定，程序相同，只是標準品溶液和樣品溶液的體積應為 40 L，工作試劑的體積應為 10 L。

圖。96 孔板磷酸鹽標準曲線。孵育 30 min 后，讀取 620 nm 處的 OD。數據表示為平均 SD (n = 2)。有效檢測范圍為 0.02-40 M 磷酸鹽。

一般考慮

孵育時間。顯色反應在室溫下 30 min 內完成。在 30 min 時讀取 OD 值。

在高濃度磷酸鹽 (> 100 M) 或存在高濃度蛋白質和金屬（例如）的情況下，可能發生沉淀。

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒

如果發生沉淀，在 H2O 中對樣品進行系列稀釋，運行試驗并測定無沉淀孔的稀釋因子。使用稀釋樣品重復測定。

酶反應緩沖液。由于任何外源性游離磷酸鹽均會干擾試驗，因此確保試驗中使用的蛋白制備液、反應緩沖液和實驗室器具不應含有游離磷酸鹽非常重要。這可以通過向緩沖液中加入工作試劑并測量顏色形成來方便地檢查。

液體處置。含量測定混合物含 0.4 M 硫酸。建議在處置前用等體積的 1 NNaOH 中和廢液。

數據分析

以 OD620 nm 對磷酸鹽標準品濃度作圖。根據標準曲線測定樣品磷酸鹽濃度。

文獻

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高通量篩選

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技術說明

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒已經過優化和配制，以提供靈敏、方便和穩健的定量測定從酶反應和天然來源中釋放的游離磷酸鹽。試劑盒的關鍵特征如下：