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膠原酶產品信息

資料來源：溶組織梭菌

IUB：3.4.24.3

膠原酶原料認證 

粗膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶，巰基蛋白酶，clostripain，胰蛋白酶樣酶和氨基肽酶的多種同工型。這種膠原蛋白和蛋白水解活性的組合對于分解細胞間基質是組織解離的重要部分是有效的。復合物的一個組分是水解酶，其在Pro-Y-Gly-Pro序列中Y-Gly鍵優先降解天然膠原中的螺旋區，其中Yzui常見為中性氨基酸。這種裂解產生易于進一步消化肽酶的產物。粗膠原酶被金屬螯合劑如半胱氨酸，EDTA或鄰菲咯啉而不是DFP抑制。它也被大血漿糖蛋白α2巨球蛋白抑制。酶活性需要Ca ²⁺。每個膠原酶的特定酶譜與獲得研究細胞的組織（或用于細胞的用途）相關聯，并且由于相關性，Worthington已經建立了幾種類型的原膠原酶：類型1,2,3和4。

• 1型粗膠原酶具有膠原酶，酪蛋白酶，clostripain和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2型含有較高的相對水平的蛋白酶活性，特別是clostripain。
• 3型含有zui低水平的次級蛋白酶。
• 4型設計為特別低的胰蛋白酶活性，以限制對膜蛋白和受體的損傷。
•純化膠原酶，代碼：CLSPA，含有極少的次要蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

沃辛頓還提供0.22μm過濾的各種預制包裝形式的過濾制劑，用于直接重建和用于細胞分離和培養過程。酶類型與不同組織的有效性之間的相關性一直很好，但不*，部分原因是可變參數的使用。然而，大多數研究人員認為粗膠原酶批次的組織分型是一項有價值的服務。Worthington酶手冊中可以找到Worthington膠原酶和污染物測定的詳細描述。此外，組織特異性參考和詳細的分離條件可以在“ Worthington組織分離指南”中找到。

膠原酶測定是Mandl的修飾，其中膠原酶與天然膠原蛋白孵育5小時，膠原分解的程度使用Moore和Stein JBC，176,367（1948）比色茚胺法測定。釋放的氨基酸表達為微摩爾亮氨酸/毫克膠原酶。

用途：粗膠原酶廣泛用于酶原初級細胞分離和組織解離過程。大多數研究人員使用粗膠原酶制劑，如1,2,3和4型或色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）; 后者通常與二級酶如彈性蛋白酶，透明質酸酶等組合。為了獲得*效果，必須將待分解的組織定制為蛋白水解活性的混合物。不同組織的類型和有效性之間的相關性已經很好，但不，并且可能部分依賴于使用和目標參數以及批次間變化。有關更多信息，請參閱膠原酶采樣程序信息。沃辛頓還出版了“ 組織解離指南”，其中提供了有關用于這些應用的酶的更多信息，以及許多細胞和組織類型的具體參考。

單位定義：一個單位在37℃，pH 7.5的5小時內從膠原中釋放一微摩爾的L-亮氨酸當量

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